மூலக்கூறு உயிரியலில், வேறுபட்ட டி.என்.ஏ தனிமைப்படுத்தும் பணிகளுக்கு நல்ல தாங்கல் தேர்வு மற்றும் தயாரித்தல் புரத வெளிப்பாட்டிற்கு நகரும் அல்லது தொடங்குவதற்கு மற்றொரு மாக்ஸி-ப்ரீட் கிட் திறக்கப்படும். அவற்றின் முக்கியமான முக்கியத்துவமும் இருந்தபோதிலும், இடையகப் பாத்திரங்கள் பெரும்பாலும் வெவ்வேறு கூறுகளுக்கு விளக்கம் அல்லது நியாயமின்றி எழுதப்பட்டவை. இது போன்ற ஒரு குளுக்கோஸ் ட்ரிஸ்-எட்ட்டா அல்லது ஜி.டி.இ பஃபர்.
$config[code] not foundGTE என்ன பயன்படுத்தப்படுகிறது?
ஜி.எ.டி., நுரையீரல் செல் கலன்களை மீண்டும் உயிர்ப்பித்தல் (திறந்த முறிவு) மற்றும் பிளாஸ்மிட் டிஎன்ஏ உள்ளே அறுவடை செய்வதற்கு முன்பு பயன்படுத்தப்படுகிறது. உயிரணு சவ்வுகளை மென்மையாக்கும் லியோஸைம், பெரும்பாலும் GTE இடையகத்துடன் சேர்த்து சேர்க்கப்படுகிறது. இந்த படிப்படியாக முழுமையான உயிரணுக்களை ஒரு ஒத்திசைவான இடைநீக்கம் செய்வதன் மூலம், பின்னர் சேர்க்கப்பட்ட சிதைவு தீர்வு அனைத்து செல்கள் பெற முடியும் நல்ல டிஎன்ஏ விளைச்சல் பெற முக்கிய உள்ளது. டி.என்.ஏ-க்காக ஒரு நிலையான சூழலை வழங்கும் அதே சமயத்தில் ஜி.டி.ஈ இதைச் செய்ய வடிவமைக்கப்பட்டுள்ளது.
ஓஸ்மாலரிட்டிக்கு குளுக்கோஸ்
50mM (மில்லிமிலார்) குளுக்கோஸ் சர்க்கரை செறிவூட்டப்பட்ட கான்செப்ட்டை பராமரிக்க ஜி.டி.இ. பஃப்பர்களிடம் சேர்க்கப்படுகிறது. செல்கள் வெளியே உள்ள கரைப்பு செறிவு செல்கள் உள்ளே அந்த நெருக்கமாக உள்ளது. இது தற்காலிக உயிரணு சிதைவுத் தடுப்பைத் தடுக்கிறது, இது குறைந்த டி.என்.ஏ விளைபொருட்களை திரட்டுதல் மற்றும் சீரழிவு காரணமாக ஏற்படுத்தும். இடையகத்தின் மற்ற பாகங்களும் தீர்வுகளின் ஒடுக்கற்பிரிவுக்கு பங்களிப்புச் செய்கின்றன, ஆனால் குளுக்கோஸ், ஒரு அல்லாத மின்முனை அல்ல, இது ஒரு நல்ல தேர்வாகும், ஏனெனில் அது தீர்வின் தாங்கல் பண்புகளுடன் தலையிடாது.
PH நிலைத்தன்மைக்கு டிரிஸ்
டிரிஸ் (ஹைட்ராக்ஸைமெதில்) அமினமித்தேன் என்ற சிறு பெயர், இது மிகவும் பொதுவான பிஹெப் இடையகம் ஆகும். ஜி.டி.இ பஃபர் வழக்கில், அமில உப்பு (டிரிஸ்-ஹெச்.சி.கி) 25 மி.மீ. பிளாஸ்மிட் டி.என்.ஏவின் அமில ஹைட்ரோகிசைஸ் (சீரழிவு) மற்றும் மற்ற செல் கூறுகளின் தேவையற்ற பக்க விளைவுகள் ஆகியவற்றைத் தடுக்க ஒரு சிறந்த பிஹெச்.
ஈ.டி.டி.ஏ டி.என்.ஏ வீழ்ச்சியைத் தடுக்கிறது
EDTA, அல்லது ethylenediaminetetraacetic அமிலம், கைப்பற்றுதல் அல்லது "chelates" உலோக அயனிகள் தீர்வு வெளியே, தேவையற்ற பக்க எதிர்வினைகளை பங்கு அவர்களை தடுக்கும். GTE இடையகத்தில், EDTA 10mM இல் சேர்க்கப்படுகிறது. அதன் முதன்மை நோக்கம் இலவச துத்தநாகம், மெக்னீசியம், மற்றும் கால்சியம் சுற்றுவதற்கு தாங்குவதில் உள்ளது, இதனால் டி.என்.ஏ சீரழிவதை தடுக்கும் சில பாதைகள் அந்த உலோகங்கள் தேவைப்படுகின்றன.
சில முக்கியமான குறிப்புகள்
உங்கள் ஜி.டி.இ. பஃபர் குளிர்ச்சியுடன் வைத்திருங்கள் மற்றும் சிறிய அளவிலான அளவுக்கு அது உண்டாக்காத பாக்டீரியாவின் வளர்ச்சியை தடுக்கிறது. சர்க்கரை மற்றும் கட்டுப்படுத்தப்பட்ட pH பெரிய வளர்ந்த நடுத்தரத்திற்காக தயாரிக்கின்றன. எப்போதும் சுத்திகரிக்கப்பட்ட தண்ணீர் பயன்படுத்த. குழாய்களின் குழாயிலிருந்து உலோக அயன்களைக் குழாய் நீரில் அதிகப்படுத்தலாம், இது எட்்டாவின் கைப்பற்றும் திறனை மூழ்கடிக்கும். உங்கள் மாதிரியில் RNA குறுக்கிடும் சந்தர்ப்பத்தை நீங்கள் சந்தேகிக்கிறீர்கள் என்றால், RNase A ஐ 100 மைக்ரோகிராம் மில்லிமீட்டரில் உங்கள் GTE இடையகத்துடன் சிக்கலை நீக்குவதற்கு சேர்க்கவும்.
